Дифференциально-диагностические среды, их состав и механизм действия. Питательные среды Дифференциальные среды микробиология
1. ПС для культивирования и изучения биохимических свойств.
1.1. Среды Эндо, Левина, Плоскирева . Используют как дифференциально-диагностические элективные среды для культивирования бактерий кишечной группы (содержит лактозу). Микроорганизмы, ферментирующие находящийся в этих средах молочный сахар (лактозу) образуют окрашенные колонии- лактозоположительные (колонии красного цвета с металлическим блеском или без блеска) . Колонии микробов, не ферментирующие лактозу, бесцветные - лактозонегативные – нежно-розовые, прозрачные, пропускающие свет.
К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70°С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного раствора сульфата натрия.
1.2.Среды с крахмалом определяют микроорганизмы, образующие амилазу. Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель раствора Люголя, - цвет среды не изменяется. Нерасщепленный крахмал дает с этим раствором синее окрашивание.
1.3.Молоко. При росте микроорганизмов, сбраживающих лактозу, свертывается.
2. Коммерческие наборы – для изучения биохимических свойств (определение набора ферментов микроорганизмов для их идентификации).
2.1. Микротесты - системы (МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды.
2.2.Системы индикаторные бумажные (СИБ) - дифференциально-диагностические среды на фильтровальной бумаге.
3. Для культивирования и дифференциации анаэробных микроорганизмов: среда Вильсон-Блера . Готовят из мясо-пептонного агара, к которому добавляют глюкозу, Na 2 S0 3 , хлорид железо FeCl 2 . На этой среде возбудитель газовой гангрены образует почернение и разрыв агара. Рост происходит в глубине агара. При этом осуществляется восстановление Na 2 S0 3 в Na 2 S (сульфит натрия), который соединяясь с хлоридом железа, образует сульфат железа черного цвета. Разрыв питательной среды связан с газообразованием.
4. ПС для изучения сахаролитических свойств:
Среды Гисса с углеводами (глюкоза, лактоза, сахароза, арабиноза и другие) в которых выявляют ферментативную активности микроорганизмов. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды. Соломенно-желтого цвета среда при положительной реакции меняет цвет на красный или интенсивно розовый, поэтому эти среды названы «пестрый ряд». Микробы, не ферментирующие данный углевод, растут на среде, не изменяя ее цвета. Наличие газа устанавливают по образованию пузырьков в средах с агаром или по скоплению его в «поплавке» на жидких средах.
Пептон - 10 г, хлорид натрия - 5 г, углевод - 10 г, реактив Андреде (фуксин)- 10 мл, вода дистиллированная до 1000 мл, рН после стерилизации 7,2-7,4.
5. ПС для изучения протеолитических свойств:
Среды с желатином . В некоторых бактериях (холерный вибрион, стафилококк, сибиреязвенная палочка и т. д.) протеолитические ферменты выявляются путем разжижения желатины.
Среды с молоком. Микроорганизмы, расщепляющие казеин (молочный белок), вызывают пептонизацию молока - оно приобретает вид молочной сыворотки.
Среды с пептоном. При расщеплении пептонов могут выделяться индол, сероводород, аммиак. Их образования определяют с помощью индикаторных бумажек. Фильтровальную бумагу заранее пропитывают определенными растворами, высушивают, нарезают полосками и, после посева культуры на МПБ, помещают под пробку между нею и стенкой пробирки. После инкубации в термостате учитывают результат. Аммиак вызывает посинение лакмусовой бумажки; при выделении сероводорода на бумажке, пропитанной раствором, содержащим ацетат свинца, бикарбонат натрия, происходит образование сульфата свинца - бумажка чернеет; индол вызывает покраснение бумажки, пропитанной горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты.
Работа № 2. Характер роста бактерий на питательных средах
(культуральные свойства)
Цель: изучить характер роста бактерий на плотной питательной среде - МПА.
Самостоятельная работа: описать культуральные свойства колоний,выросших на МПА, результаты внести в таблицу
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Конец работы -
Эта тема принадлежит разделу:
Учебно-методический комплекс по «Микробиологии, вирусологии»
Гбоу впо тюмгма минздрава России.. кафедра микробиологии.. учебно методический комплекс..
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ:
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
Твитнуть |
Все темы данного раздела:
Методы создания анаэробных условий
1) Физические методы. Методы основаны на выращивании микроорганизмов в среде без воздуха
Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества:
В качестве ред
К работе № 3
Культивирование вирусов
Для культивирования вирусов используют:
1) Куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью получени
Самостоятельная работа во внеурочное время
Что изображено на фотографии?
Цель применения устройства? Какие
100 р бонус за первый заказ
Выберите тип работы Дипломная работа Курсовая работа Реферат Магистерская диссертация Отчёт по практике Статья Доклад Рецензия Контрольная работа Монография Решение задач Бизнес-план Ответы на вопросы Творческая работа Эссе Чертёж Сочинения Перевод Презентации Набор текста Другое Повышение уникальности текста Кандидатская диссертация Лабораторная работа Помощь on-line
Узнать цену
Дифференциально-диагностические среды - специальные смеси питательных веществ, применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их свойств. При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов. Одни из них способны расщеплять белки, другие -углеводы, третьи - вызывать реакции окисления и восстановления и т. д. Благодаря действию ферментов в дифференциально-диагностической среде происходят соответствующие изменения. Дифференциально-диагностические среды можно разделить на четыре основные группы.
1. Среды, содержащие белок и выявляющие способность микробов расщеплять белки (протеолитические Свойства): мясо-пептонная желатина «столбиком», свернутая лошадиная или бычья сыворотка, молоко, кровяной агар. При посеве бактерий проколом в мясо-пептонную желатину, «столбиком» в случае расщепления белка наблюдают разжижение среды. При посеве на среду со свернутой сывороткой расщепление белка определяют по разжижению среды и образованию углублений на ее поверхности. Расщепление микробом молока выявляется просветлением или растворением первоначально свернувшегося молока. Наличие гемолитической активности исследуемой культуры проверяют посевом ее в чашку Петри на специальный кровяной агар. В результате разрушения эритроцитов вокруг колоний (например, гемолитического стрептококка или стафилококка) образуются зоны просветления.
2. Среды для выявления способности микробов расщеплять углеводы и высокоатомные спирты (Эндо среда, Левина среда, Расселла среда, Дригальского - Конради среда, Рапопорт - Вайнтрауба среда, Шустовой среда). Для выявления этих свойств микроорганизмов применяют также «пестрый» ряд, т. е. серию пробирок, содержащих питательные среды, включающие различные углеводы, многоатомные спирты и индикатор. В качестве индикаторов пользуются лакмусовой настойкой или бромтимоловым синим. Разложение какого-либо из углеводов с образованием кислоты выявляют по изменению цвета индикатора, образование газа- по заполнению газом и всплыванию специального стеклянного поплавка в жидкой среде. Или применяют полужидкие Гисса среды (см.) с 0,5% агара с соответствующими сахарами и индикатором Андраде. После посева микроба на эти среды образование кислоты выявляют покраснением среды, а образование газа - по появлению его пузырьков в агаре или по разрыву и сдвигу вверх агарового столбика. К дифференциально-диагностическим средам второй группы относят также крахмальный агар, служащий для определения способности микробов расщеплять крахмал, среду Кларка и др.
3. Среды, на которых выявляется способность микробов обесцвечивать красители, добавленные к бульону: метиленовый синий, тионин, лакмус, индигокармин, нейтральный красный или другие (среда Ротбергера, среда Омелянского). К третьей группе относят также среды с нитратами, служащие для определения способности микробов восстанавливать соли азотной кислоты (нитраты) в соли азотистой кислоты (нитриты) и далее в аммиак или свободный азот.
4. Среды, выявляющие способность микробов усваивать вещества, которые не усваиваются другими микробами, например среда с лимоннокислым натрием (цитратный агар Симонса) для отличия кишечной палочки, которая лишена способности ассимилировать эту среду, от других бактерий кишечной группы или среда с олеиновокислым натрием для дифференциации дифтерийной палочки от ложно дифтерийной и дифтероидов (агар Энжеринга).
К дифференциально-диагностическим средам относят также среды для дифференциации анаэробов, теллуритовые среды для дифференциации дифтерийных бактерий, среды с мочевиной, щелочные среды (Дьедонне агар) для культивирования холерного вибриона и др.
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.
Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины группы В, никотиновая кислота и др.).
Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.
В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин-кислотный гидролизат крови животных, аминопептид - ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие - 0,3- 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80-86 °С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10-15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.
По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду - питательный бульон и плотную - питательный агар. Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред - сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона - в щелочной среде и т. д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.
Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды . В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследовательской работе и в микробиологической промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.
В последние годы в целях экономии питательных сред и ускоренной идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.) применяются так называемые микротест-системы(МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды. Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.
Вопрос №9. Принципы и методы выделения чистых культур бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют по одному признаку на биологические варианты - биовары . Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют хемоварами , по антигенным свойствам - сероварами , по чувствительности к фагу - фаговарами . Культуры микроорганизмов одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же источника, называют штаммами , которые обычно обозначаются номерами или какими-либо символами. Чистые культуры бактерий в диагностических бактериологических лабораториях получают из изолированных колоний, пересевая их петлей в пробирки с твердыми или, реже, жидкими питательными средами.
Колония представляет собой видимое изолированное скопление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим признакам.
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизма.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент - Pseu-domonas aeruginosa.
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят дополнительные исследования по выялвениб соответствующего маркера – определению фермента, антигена, чувствительности к Фанам.
Методы выделения чистых культур бактерий.
Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри - металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами над г писывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.
Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах:
Бактерии, засеянные в определенный, но не изменяющийся объем жидкой питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что в дальнейшем приводит к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим, а культуру – периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура – непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузной или поверхностный (в виде пленки) рост культуры.
Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах:
Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.
Пигмент, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают ее, например синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) окрашивает среду в синий цвет. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. Так, колонии «чудесной палочки» имеют кроваво – красный пигмент, растворимый в спирте. И, наконец, существуют пигменты, нерастворимые ни в воде, ни в органических соединениях.
Вид, форму, цвет и другие особенности колоний на плотной питательной среде (культуральные свойства) учитывают при идентификации бактерий, а также отборе колоний для получения чистых культур.
В промышленных условиях при получении биомассы микроорганизмов с целью приготовления антибиотиков, вакцин, диагностических препаратов и эубиотиков культивирование в основном осуществляют в ферментерах при строгом соблюдении оптимальных параметров для роста и размножения культур.
Вопрос №10. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение). Типы дыхания бактерий.
Дыхание, или биологическое окисление , основано на окислительно-восстановительных реакциях, идущих с образованием АТФ-универсального аккумулятора химической энергии. Энергия необходима микробной клетке для ее жизнедеятельности. При дыхании происходят процессы окисления и восстановления: окисление - отдача донорами (молекулами или атомами) водорода или электронов; восстановление - присоединение водорода или электронов к акцептору. Акцептором водорода или электронов может быть молекулярный кислород (такое дыхание называется аэробным) или нитрат, сульфат, фумарат (такое дыхание называется анаэробным - нитратным, сульфатным, фумаратным).
Анаэробиоз (от греч. аег - воздух + bios - жизнь) - жизнедеятельность, протекающая при отсутствии свободного кислорода. Если донорами и акцепторами водорода являются органические соединения, то такой процесс называется брожением . При брожении происходит ферментативное расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.
По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три основные группы: облигатные, т.е. обязательные, аэробы, облигатные анаэробы и факультативные анаэробы.
Типы дыхания бактерий:
· Строгие аэробы. Функционируют в присутствие О 2
· Микроаэрофилы. Нуждаются в О 2 в меньшей степени.
· Факультативные анаэробы. Живут в присутствии О 2 и без негою могут дышать кислородными носителями: сульфаты, карбонаты.
· Облигатные анаэробы. Бактерии, которые бродят. Для них О 2 ядовит.
· Культура – микроорганизмы, выросшие на питательной среде.
· Колония – скопление микробных клеток.
· Чистая культура – микробы одного вида.
· Клон – генетически однородная популяция м/о, выделенная из одной микробной клетки при ее прямой изоляции.
· Штамм – чистая культура микробов выделенная из определенного источника в определенное время.
(син. П. с. дифференциальная) П. с., позволяющая отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам.
- - жидкие, полужидкие или плотные субстраты, используемые для выращивания микроорганизмов в лабораторных или производственных условиях...
Словарь микробиологии
- - среды с известным количественным и качественным составом ингредиентов. Они обычно состоят из аминокислот, аммонийных, азотнокислых и др. солей, углеводов, ростовых факторов и стимуляторов роста...
Словарь микробиологии
- - гигроскопические порошки, содержащие все компоненты среды, кроме свободной воды. Растворяются в воде в пределах 1,5 - 6%...
Словарь микробиологии
- - сре́ды пита́тельные, субстраты, используемые для культивирования в искусственных условиях микроорганизмов и культур тканей...
Ветеринарный энциклопедический словарь
- - среды, на которых выращивают живые организмы. П. с. бывают: естественные, для бактерий и грибов; искусственные - для культур бактерий и грибов; синтетические - для бактерий и грибов...
Словарь ботанических терминов
- - среды, применяемые для выращивания микроорганизмов. Бывают жидкими и плотными. Для получения последних к жидким средам добавляют агар или желатину. К плотным С. п. относится также гель кремнекислый...
Толковый словарь по почвоведению
- - метод стимуляции отхождения члеников гельминтов с калом путем применения субтерапевтической дозы противоглистного средства, используемый при диагностике гельминтозов...
Большой медицинский словарь
- - см. Гисса среды...
Большой медицинский словарь
- - см. Среды Дифко...
Большой медицинский словарь
- - см. Лифсона среды...
Большой медицинский словарь
- - см. Мак-Конки среды...
Большой медицинский словарь
- - см. Сабуро среды...
Большой медицинский словарь
- - "... - препараты, предназначенные для выявления, накопления, культивирования, дифференциальной диагностики, транспортирования и хранения микроорганизмов.....
Официальная терминология
- - Под этим именем подразумевают различного рода субстраты, приготовляемые для изучения жизнедеятельности микроорганизмов при определенных условиях, изменяемых по воле экспериментатора...
Энциклопедический словарь Брокгауза и Евфрона
- - специальные смеси питательных веществ, на которых выращивают микроорганизмы для определения их видовой принадлежности...
- - жидкие или плотные среды, применяемые для выращивания в лабораторных или промышленных условиях бактерий, дрожжей, микроскопических грибов, водорослей, простейших, вирусов и культур растительных или...
Большая Советская энциклопедия
"питательные среды дифференциально-диагностическая" в книгах
Из книги Микробиология автора Ткаченко Ксения Викторовна3. Питательные среды и методы выделения чистых культур
автора Ткаченко Ксения Викторовна3. Питательные среды и методы выделения чистых культур Для культивирования бактерий используют питательные среды, к которым предъявляется ряд требований.1. Питательность. Бактерии должны содержать все необходимые питательные вещества.2. Изотоничность. Бактерии должны
3. Питательные среды и методы выделения чистых культур
Из книги Микробиология автора Ткаченко Ксения Викторовна3. Питательные среды и методы выделения чистых культур Для культивирования бактерий используют питательные среды, к которым предъявляется ряд требований.1. Питательность. Бактерии должны содержать все необходимые питательные вещества.2. Изотоничность. Бактерии должны
3. Питательные среды и методы выделения чистых культур
Из книги Микробиология: конспект лекций автора Ткаченко Ксения Викторовна3. Питательные среды и методы выделения чистых культур Для культивирования бактерий используют питательные среды, к которым предъявляется ряд требований.1. Питательность. Бактерии должны содержать все необходимые питательные вещества.2. Изотоничность. Бактерии должны
Дифференциально-диагностические среды
БСЭДифференциально-разностные уравнения
Из книги Большая Советская Энциклопедия (ДИ) автора БСЭПитательные среды
Из книги Большая Советская Энциклопедия (ПИ) автора БСЭДиагностическая палочка
Из книги Акупунктура автора Судьина НатальяДиагностическая палочка Массажное воздействие на точки соответствия можно осуществлять не только руками.Например, очень часто врачи-акупунктурники используют для поиска болевых точек соответствия и их стимуляции диагностическую палочку. На концах этой палочки есть
Диагностическая гимнастика
Из книги Изометрическая гимнастика для занятых людей автора Борщенко Игорь АнатольевичДиагностическая гимнастика Предлагаем вам пройти оригинальное тестирование в виде простых упражнений. Эта гимнастика поможет обратить ваше внимание на наличие тех или иных проблем в разных отделах позвоночника и
Диагностическая гимнастика
Из книги Позвоночник без боли [Курс изометрической гимнастики] автора Борщенко Игорь АнатольевичДиагностическая гимнастика
Из книги Шея без боли [Уникальный изометрический тренинг] автора Борщенко Игорь АнатольевичДиагностическая гимнастика Предлагаем вам перед началом занятий изометрической гимнастикой пройти оригинальное тестирование в виде простых упражнений. Эта гимнастика поможет обратить ваше внимание на наличие тех или иных проблем в разных отделах позвоночника и
Диагностическая гимнастика
Из книги Поясница без боли [Уникальный изометрический тренинг] автора Борщенко Игорь АнатольевичДиагностическая гимнастика Предлагаем вам перед началом занятий изометрической гимнастикой пройти оригинальное тестирование в виде простых упражнений. Эта гимнастика поможет обратить ваше внимание на наличие тех или иных проблем в поясничном отделе позвоночника и
«Дифференциально-диагностический опросник» (ДДО)
Из книги Мотивация и мотивы автора Ильин Евгений Павлович«Дифференциально-диагностический опросник» (ДДО) Методика разработана Е. А. Климовым и предназначена для выявления склонности к тому или иному типу профессии в соответствии с разработанной им классификацией типов.ИнструкцияПредположим, что после соответствующего
автора Госстандарт России13.1.3 Изменения среды применения или среды разработки
Из книги ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ВСТРОЕННЫХ СИСТЕМ. Общие требования к разработке и документированию автора Госстандарт России13.1.3 Изменения среды применения или среды разработки Использование и модификация ранее разработанного ПО могут включать в себя новую среду разработки, новый объектный процессор или другие аппаратные средства, или интеграцию с ПО, которое отлично от используемого для
Среда Штерна. Используют для дифференциации сальмонелл. К 1000 см 3 МПБ или бульона Хоттингера добавляют 2,5 см 3 10%-ного насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 16,6 см 3 10%-ного водного раствора натрия сульфита (Na 2 S0 4) и 10 см 3 глицерина. Разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 112° С. Готовая среда имеет желтую окраску. Если испытуемая культура относится к S. typhimurium, которая способна ферментировать глицерин, то среда приобретает фиолетовый оттенок.
Среда Биттера. Используют для дифференциации сальмонелл. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 0,05 г пептона, 0,5 г натрия цитрата, 5 г натрия хлорида, 5 г рамнозы (или арабинозы). Кипятят на водяной бане 3-5 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112° С или текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Если испытуемая культура относится к сальмонеллам, способным ферментировать рамнозу или арабинозу (S. typhimurium), то при добавлении к суточной культуре (выращенной на данной среде) 2 капель 0,5%-ного спиртового раствора метилового красного среда приобретает красную окраску.
Среда для посева по Свену -Гарду. Используют для выявления у сальмонелл специфической фазы жгутикового антигена. К 1000 см 3 МПБ или бульона Хоттингера добавляют 8 г агара и растворяют путем кипячения на водяной бане. Устанавливают рН 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 121° С.
Среды с аминокислотами. Используют для определения способности энтеробактерий в анаэробных условиях расщеплять левовращающие аминокислоты - лизин, орнитин, аргинин. В 600 см 3 дистиллированной воды растворяют 5 г пептона и 1 г глюкозы, устанавливают рН 6,0-6,1. Приготовленный раствор разливают по 150 см 3 в четыре колбы. В каждую из трех колб вносят по 10 г одной из аминокислот. Четвертая колба остается в качестве контрольной. Содержимое всех колб кипятят на водяной бане 5-10 мин, устанавливают рН 6,0-6,1. Во все че тыре колбы вносят по 0,6 см 3 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезоло-вого пурпурного или бромтимолового синего и по 5 см 3 0,1%-ного спиртового раствора крезолового красного. Разливают в агглютинационные пробирки по 2-3 см 3 и стерилизуют 30 мин при 110° С.
Для проведения теста в пробирки, содержащие аминокислоту, и в контрольную пробирку засевают испытуемую культуру, после чего заливают стерильным вазелиновым маслом (слоем толщиной 10 мм) и инкубируют. Учет проводят в течение 4 сут. При положительной реакции среды с аминокислотами приобретают фиолетовую или синюю (в зависимости от индикатора) окраску, в контрольных пробирках среда имеет желтую окраску.
Состав 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного: бромкрезоловый пурпурный - 1,6 г, спирт этиловый 96° - 100 см 3 .
Состав 0,1%-ного спиртового раствора крезолового красного: крезоловый красный - 0,1 г, спирт этиловый 96° - 100 см 3 .
Среды, содержащие органические кислоты. Используют для дифференциации сальмонелл по их способности расщеплять органические кислоты (тартраты, мукаты, натрия цитрат). В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, добавляют 8,5 см 3 0,1 Н раствора натрия гидроокиси, 12 см 3 0,25%-ного водного раствора бромтимолового синего, 10 г D-тартрата (или одну из следующих кислот: 5 г L-тартрата, 5 г мезотартрата, 10 г муката, 10 г натрия цитрата). Устанавливают рН 7,4, разливают в пробирки и стерилизуют 20 мин при 112° С. Готовая среда синезеленого цвета. При положительной реакции в процессе инкубации среда с культурой приобретает зелено-желтую окраску.
Для получения более четких результатов в конце срока инкубации в пробирки с сомнительной или отрицательной реакцией добавляют несколько капель насыщенного раствора ацетата свинца, в результате при отрицательной реакции выпадает обильный осадок (до 2 / 3 объема среды), при положительной - выпавший осадок незначителен.
Среда с триптофаном.
Используют для определения у бактерий наличия триптофандезаминазы. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 2 г DL-триптофана. Устанавливают рН 6,7-6,9. Для определения способности бактерий к дезаминированию триптофана испытуемую агаровую культуру бактериологической петлей вносят в пробирку с 0,5 см 3 раствора триптофана и инкубируют 30 мин при 37° С, после чего вносят
1 каплю 10%-ного водного раствора железа хлористого трехвалентного (FeCl 3). При положительной реакции среда приобретает темно-красную окраску, при отрицательной - желтую.
Среда с калием цианидом. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 0,225 г калия дигидрофосфата (КН 2 Р0 4), 5,64 г натрия гидрофосфата (Na,HP0 4). Устанавливают рН 7,6, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 112° С. После стерилизации быстро охлаждают. Среду этого состава используют в качестве контрольной. Непосредственно перед применением к 100 см 3 среды асептически добавляют 1,5 см 3 свежеприготовленного 0,5%-ного водного раствора калия цианида (KCN), разливают по пробиркам и закрывают корковыми пробками.
Пробу считают положительной, если через 24-48 ч после посева культуры в среде заметно помутнение или опалесценция. При отрицательном результате среда остается абсолютно прозрачной, в то время как в контрольной пробирке заметно помутнение.
Среда Клиглер. Используют для определения образования сероводорода. В 1000 см 3 МПБ растворяют при кипячении 20 г пептона, 5 г натрия хлорида, 0,4 г натрия сульфида, 0,08 г натрия тиосульфата, 20 г агара. Устанавливают рН 7,8, затем снова кипятят, фильтруют через бумажный фильтр и добавляют 0,5 г железа сернокислого, растворенного в небольшом количестве воды, 10 г лактозы, 1 г глюкозы и 12 см 3 0,2%-ного раствора фенолрота в 50%-ном спирте. Среду разливают по 6-7 см 3 в пробирки и стерилизуют 30 мин при 112° С. Среда имеет оранжево-красную окраску. При образовании сероводорода среда окрашивается в черный цвет.
Среда Кларка.
Используется для постановки реакции Фогес-Проскауэра и пробы с метиловым красным для определения окисления глюкозы с образованием 2-кетоглюконата. В 100 см 3 дистиллированной воды растворяют 0,5 г калия гидрофосфата (К 2 НР0 4), 0,7 г пептона, 0,5 г глюкозы. Кипятят 2-3 мин, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 6,9, разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при
111° С.
Реакцией Фогес-Проскауэра выявляют промежуточный продукт расщепления глюкозы - ацетилметилкарбинол (ацетоин). Для этого испытуемую культуру выращивают на среде Кларка 4-5 дней в 2 пробирках. Одну пробирку культивируют при 25° С, другую при 37° С. Из обеих пробирок по 1 см 3 культуры переносят в другие пробирки и добавляют 0,6 см 3 5%-ного спиртового раствора а-нафтола, смесь перемешивают. Затем добавляют 0,2 см 3 .40%-ного водного раствора КОН. Тщательно перемешивают и инкубируют 1 ч.
Учет реакции проводят через 15 и 60 мин. Положительная реакция - вишневое окрашивание среды.
Тестом с метиловым красным устанавливают снижение рН среды при расщеплении глюкозы до 4,4-6,0. Раствор метилового красного готовят добавлением к 0,1 г метилрота 300 см 3 95%-ного этанола. После растворения красителя добавляют 200 см 3 дистиллированной воды.
Для постановки теста в пробирку с 5 см 3 среды Кларка вносят петлю испытуемой культуры и инкубируют 2-5 сут при 25° С. Затем добавляют 5-6 капель реактива метиловый красный и следят за изменением окраски. При положительном результате (рН 4,0-6,0) среда приобретает красный цвет. При отрицательном результате (рН 6,0-7,0) среда приобретает желтый цвет.
Среда с мочевиной по Кристенсену. Используют для определения способности бактерий к гидролизу мочевины (уреазная активность) с образованием аммиака и углекислоты. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 1 г пептона, 5 г натрия хлорида, 2 г калия дигидрофосфата (КН 2 Р0 4), 20 г агара. Смесь стерилизуют 20 мин при 115° С. Затем вносят 1 г глюкозы и 6 см 3 0,2%-ного раствора фенилрота, стерилизуют текучим паром 1 ч, охлаждают до 50° С и асептически добавляют 100 см 3 20%-ного водного раствора мочевины, стерилизованного фильтрацией. Среду разливают по пробиркам и скашивают.
Испытуемую культуру засевают на поверхность скошенного агара и культивируют 1-4 сут. Положительный результат (защелачивание среды) - красно-малиновое окрашивание среды.
Среда Симмонса. Используют для определения способности бактерий утилизировать цитрат как единственный источник углерода. Состав: агар - 20 г, NaCl - 5 г, MgS0 4 х 7Н 2 0 - 0,2 г, К 2 НР0 4 - 1 г, NH 4 х Н 2 Р0 4 - 1 г, C 6 H 5 0 ? Na 3 х 5Н 2 0 - 3 г, бромтимоловый синий - 0,08 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 .
В дистиллированной воде растворяют агар. Соли растворяют отдельно в небольшом объеме воды и затем смешивают с агаром, до объема 1000 см 3 . Устанавливают рН 7,2, добавляют 40 см 3 0,2%-ного водного раствора бромтимолового синего. Среду перемешивают, разливают в пробирки по 5-7 см 3 и стерилизуют 15 мин при 121° С. После автоклавирования агар скашивают.
Испытуемую культуру засевают на поверхность агара и инкубируют. При положительном результате отмечают рост культуры на среде и изменение ее цвета с оливкового на синий.
Среда с алгинатом натрия. Используют для определения способности бактерий утилизировать натрия алгинат как единственный источник углерода. Состав среды аналогичен составу среды Симмонса, но вместо натрия цитрата вносится 2,5 г натрия алгината. Положительным считают изменение цвета среды. Микроорганизмы, не обладающие способностью усваивать натрия алгинат, на данной среде не растут.
Среды Гисса. Используют для изучения способности ферментации углеводов с образованием кислоты и газов. Состав: пептон - 10 г, натрия хлорид - 5 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 , 0,1%-ный индикатор Андреде, углевод 0,5% (адонит, глицерин, сорбит, дульцит, целлобиоза, раффиноза, трегалоза, салицин, арабиноза, мальтоза, рамноза, ксилоза) или 1,0% (глюкоза, лактоза, маннит, сахароза).
В дистиллированной воде растворяют навески пептона, натрия хлорида, добавляют индикатор, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,1-7,2 и стерилизуют 15 мин при 111 ° С. Затем добавляют углевод. Приготовленную среду разливают по пробиркам и стерилизуют
15 мин при 110° С.
Среда для выявления фенилаланиндезаминазы. Состав: сухой дрожжевой экстракт-3 г, натрий хлористый - 5 г, L-фенилалапин - 1 г, Na 2 HP0 4 - 1 г, агар - 12 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 . Смешивают воду и дрожжевой экстракт, нагревают, добавляют компоненты и кипятят до расплавления агара, рН среды 7,0-7,2. Горячую среду фильтруют, разливают в пробирки по 2-3 см 3 и стерилизуют 30 мин при 112° С. Среду скашивают.
Испытуемую культуру засевают штрихом по поверхности агара и через сутки инкубации добавляют на поверхность культуры несколько капель 10%-ного водного раствора железа хлорида (FeCl 3). При дезаминировании фенилаланина среда окрашивается в зеленый цвет, при отрицательном результате сохраняется желтое окрашивание.
Среда для выявления β-галактозидазы. В 100 см 3 расплавленного и охлажденного до 40-45° С МПА асептически добавляют 20 см 3 1%-ного водного раствора О-нитрофенил-β-D-галактопиранозид. Среду разливают по пробиркам.
Испытуемую культуру засевают уколом петлей до дна пробирки. Посевы инкубируют 24 ч при 37° С.
При положительной реакции среда окрашивается в желтый цвет одним из конечных продуктов гидролиза О-нитрофенил-β-D-галактопиранозида О-нитрофенолом.
Среды для выявления лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы и чргининдегидролазы. Состав: мясная вода - 400 см 3 , пептон - 5 г, глюкоза - 1 г, вода дистиллированная - 600 см 3 , 0,1%-ный спиртовой раствор крезолового красного - 5 см 3 , 1,6%-ный спиртовой раствор бромкрезолового пурпурного - 0,6 см 3 , L-лизин (или орнитин, или аргинин) -10 г.
Мясную воду, пептон, глюкозу и дистиллированную воду смешивают, устанавливают рН 6,0-6,1. Вносят аминокислоту, кипятят 8-10 мин, добавляют индикатор и разливают в агглютинационные пробирки по
3 см 3 . Стерилизуют 30 мин при 110° С. Цвет среды розовый.
Испытуемую культуру засевают в среды с аминокислотами (опыт) и среду безаминокислоты (контроль). Во все пробирки вносят стерильное вазелиновое иасло до получения слоя в 4-5 мм. Пробирки инкубируют 4 дня при 37° С.
При положительной реакции (защелачивание среды) наблюдается синee окрашивание в опытных пробирках и желтое - в контрольной.
Среда для определения пиразинамидазной активности у Y.enterocolitica . Состав: трипсинизированный соевый агар - 30 г, дрожжевой экстракт сухой - 3 г, пиразинкарбоксиамид - 1 г, трисмалат буфер 0,2 М, рН 6,0-1000 см 3 .
Составные части среды смешивают и подогревают на водяной бане до их растворения. Разливают по 5 см 3 в пробирки, стерилизуют 30 мин при 112° С и скашивают.
Среда для определения калъцийзависимости роста у Y. Enterocolitica . В качестве питательной основы используют коммерческую среду для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (агар АГВ).
К стерильному расплавленному и охлажденному до 50° С агару добавляют (из расчета на 100 см 3) 8 см 3 0,25 М стерильного натрия щавелевокислого, среду тщательно перемешивают и вносят 4 см 3 0,5 М стерильного раствора магния хлорида. Готовую среду разливают по чашкам Петри.
Определение индолообразования.
Испытуемую культуру выращивают в пробирке с бульоном Хоттингера. В пробирку с культурой вносят 2-3 капли эфира, тщательно ее встряхивают, оставляют в покое до отстаивания на поверхности среды слоя эфира. Осторожно добавляют
0,5 см 3 реактива Эрлиха, выдерживают 5 мин и учитывают результат. При наличии индолообразования слой эфира приобретает розово-красный цвет.
Для приготовления реактива Эрлиха в 95 см 3 96%-ного этанола растворяют 1 г парадиметиламинобензальдегида и добавляют 20 см 3 концентрированной хлористоводородной кислоты (НС1).