Что входит в пцр. Как правильно сдавать мазок и другие анализы на пцр

ПЦР диагностика - что это такое? Суть Полимеразно-Цепной Реакции заключается в том, что для исследования биологического материала применяются маркеры особого типа, которые быстро анализируют ДНК возбудителей инфекции. В гинекологии существуют разные методы ПЦР анализов у женщин в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, мазки и т.д.). После обработки данных выявляют тип возбудителя (это т.н. "ПЦР качественный анализ") и/или их концентрацию - этот тип исследования называется "ПЦР количественный анализ".

Сдача анализов методом ПЦР позволяет быстро провериться на возбудителей инфекционной патологии тогда, когда это не представляется возможным сделать другими анализами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопией). В современной лабораторной диагностике ПЦР - самый эффективный и лучший способ обнаружения ДНК микробов и вирусов. Тест позволяет гинекологу и другим врачам клиники не только установить причину недомогания у женщин и мужчин, но и контролировать ход процесса, правильно оценить результат проведенной терапии.

Цены ПЦР диагностики

Инфекция	ПЦР	Цена
Хламидии (Clamidia Trachomatis)	качественный	450
Хламидии	количественный	850
Уреаплазма (U. urealiticum / U. parvum)	качественный	450
Уреаплазма	количественный	750
Микоплазма (Micoplasma Hominis)	качественный	450
Микоплазма	количественный	750
Микоплазма (Micoplasma Genitalium)	качественный	450
Микоплазма	количественный	750
Гарднерелла (Gardnaerella vaginalis)	качественный	450
Трихомонада (Trichomonas vaginalis)	качественный	400
Трихомонада	количественный	850
	качественный	500
Гонококки (Neisseria gohorrhoeae)	количественный	650
Цитомегаловирус (CMV)	качественный	400
Возбудитель сифилиса (Treponema pallidum)	качественный	500
Кандида (Candida albicans)	качественный	450
Кандида (Candida albicans / Candida glabrata / Candida crusei)	качественный	750
Вирус герпеса I и II типа (HSV)	качественный	450
Вирус Эпштейн-Барра	качественный	500
Вирус Варицелла-Зостер	качественный	350
Вирусы папилломы человека

ЧТО ПОКАЗЫВАЕТ ПЦР

Качественный анализ ПЦР даёт указание на прямое пристуствие возбудителя инфекции в организме человека или животного. Сдать можно как мазок практически любой локализации (половые органы, уретра, ротоглотка и пр.), так и ПЦР анализы крови . По мазку или соскобу в гинекологии проверяют на хламидии, уреа- и микоплазмы, герпес-вирус, ВПЧ и прочие микробы. Результат ДНК анализа выдается на руки пациенту с заключением лаборатории "обнаружено" или "не обнаружено". В случае с анализом крови он позволяет на самой ранней стадии выявить ВИЧ, гепатит, герпес, цитомегаловирус и другие микроорганизмы, а в ряде случаев - и определить их генотип и показывает количество.

Количественные анализы ПЦР.
Исследование позволяет не только быстро выявить искомый генетический материал, но и показать концентрацию их ДНК (количественный метод ПЦР). Определение типа и количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если обнаружены, например, микоплазма (количественное определение ДНК), типирование уреаплазмы (количественное определение ДНК) или, что особенно важно, можно сделать генотипирование и количественное определение вирусной нагрузки в анализах при ВПЧ-инфекции .

РЕЗУЛЬТАТЫ ПЦР

Из всего сказанного понятно, что такое ПЦР анализ и каковы преимущества данного теста в гинекологии. Еще один важный нюанс этой диагностики - расшифровка результата доступна и удобна для непрофессионала. Учитывая, сколько делается анализ ПЦР в клинике, а также сроки готовности заключения (лаборатория обычно выдает информацию через 1-2 суток), данный метод диагностики становится лучшим выбором для определения всех основных гинекологических и прочих инфекций.

Лаборатория при качественном методе проведения ДНК исследования женских и мужских мазков делает заключение двух типов:

"ПЦР отрицательный" - в исследуемом материале не обнаружено возбудителя и
"ПЦР положительный" - в тесте были найдены РНК или ДНК микроба или вируса.

ПЦР в гинекологии

Показания к сдаче данных тестов у женщин следующие:

Подозрение на возможность инфицирования ИППП;
Анонимное обследование;
Наличие выделений из половых путей, зуда;
Боли внизу живота;
Дискомфорт при мочеиспускании;
Боли при половых контактах;
Повышенные лейкоциты в анализе мазка на флору;
Наличие эрозии на шейке матки;
Планирование беременности;
Проблемы с зачатием и вынашиванием ребенка;
Подготовка к гинекологическим операциям, ЭКО;
В профилактических целях.

Где лучше сдавать анализы на ПЦР в Москве?
Данный тип диагностики в гинекологии относится к современным и высокотехнологическим способам. Сдавать анализы на инфекции методом ПЦР следует в клинике, которая обладает всем необходимым для получения полноценных результатов. В нашем медцентре взятие материла проводится квалифицированными, опытными врачами гинекологами (не средним персоналом в процедурном кабинете), используются одноразовые инструменты и специальные лабораторные материалы, а полученные от пациентов образцы ежедневно отправляются в работу. Это позволяет не только получить результаты ПЦР быстро, но и обеспечить их достоверность. По желанию - полная анонимность обследования.

Сколько стоит ПЦР?
Данная услуга предоставляется многими медицинскими учреждениями столицы. На стоимость оказывают влияние множество факторов, начиная от месторасположение и заканчивая внутренней ценовой политикой. Тем не менее, есть объективные факторы, которые определяют среднюю минимальную цифру, ниже которой качественная и достоверная услуга оказана быть не может в силу упомянутых факторов. Цена ПЦР диагностики в клиниках Москвы на некоторые инфекции в среднем следующая:

качественный анализ мазка ПЦР - 400 - 500 руб;
количественный анализ ПЦР мазок - от 600 руб (1ед);
РНК диагностика соскоба - от 1 000 руб (1ед);
ПЦР анализ крови качественный (например, на герпес, ВПЧ, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус) - 450 - 550 руб, количественный - от 2 000 руб;
ВИЧ ДНК качественный (опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в доклинический период) - от 2 000 руб, РНК количественный - от 7 000 руб, резистентность - от 14 000 руб.

Подготовка к ПЦР

Для получения правильных, достоверных результатов исследования, девушкам и женщинам перед тем, как пойти сдать анализы на инфекции, следует придерживаться определенных правил:

За 1-2 дня до визита в клинику для сдачи анализа отказаться от половых актов;
- воздержаться от мочеиспускания за 1,5 - 2 часа до мазка;
- проводить гигиену наружных половых органов простой водой, без моющих средств, исключить спринцевания;
- исключить использование вагинальных таблеток, свечей;
- не сдавать ПЦР анализы во время месячных;
- являясь девственницей, перед осмотром заранее предупредите об этом гинеколога.

Как сдать анализы ПЦР

Сдать ПЦР у нас в клинике, в том числе анонимно, довольно просто. Далее мы рассажем как берут ПЦР у женщин и мужчин и откуда, из каких мест это исследование наиболее информативно.

В случае с женщиной анализ берётся врачом гинекологом. Обычно это бывает на первичном приеме у врача или при явке просто на сдачу анализов на инфекции, без предварительной консультации. Все по вашему желанию. Вы говорите свои пожелания, на какие именно инфекции хотелось бы провериться, и после этого начинается непосредственно сама процедура забора материала. Пациентка раздевается ниже пояса, располагается на кресле. Раздвинув малые половые губы, доктор вводит во влагалище гинекологическое зеркало подходящего размера. Гинекологи берут ПЦР у женщин обычно из шейки матки, а также мочеиспускательного канала. В последнем случае перед введением зондика производится кратковременный массаж уретры пальцем, введенным во влагалище. В случае, если анализ ПЦР сдают девочки-подростки или девушки девственницы, то зеркало не используется, а образцы выделений берут через отверстие в девственной плеве или области предверия вагины. Полученный материал помещается в герметичную пробирку со специальной средой и отправляется в лабораторию.

Взятие данного анализа у мужчин особых сложностей не представляет. Зонд вводится в уретру на глубине 3-4 см, несколько раз проворачивается по и против часовой стрелки. Материал также помещается в пробирку для последующей диагностики.

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Метод полимеразной цепной реакции был открыт почти тридцать лет назад американским учёным по имени Кэрри Мюллис . Методика широко распространена в медицине в качестве диагностического инструмента, и суть её состоит в копировании участка ДНК при помощи специального фермента (полимеразы ) искусственным путём в пробирке.

В каких областях медицины применяется этот метод?

Для чего выполняется копирование ДНК и как это может послужить медицине?
Данная методика позволяет:

Выделять и клонировать гены.
Диагностировать генетические и инфекционные заболевания.
Определять отцовство. Ребенок частично наследует от своих биологических родителей генетические особенности, однако имеет при этом свою собственную уникальную генетическую идентификацию. Наличие у него некоторых генов, идентичных родительским генам – позволяет говорить об установлении родства.

Полимеразная цепная реакция применяется также в криминалистической практике.

На месте преступления судмедэксперты собирают образцы генетических материалов. К ним относятся: волосы, слюна, кровь. Впоследствии, благодаря методике полимеразной реакции, можно амплифицировать ДНК и сравнить идентичность взятой пробы с генетическим материалом подозреваемого человека.

В медицине эффективно используется полимеразная цепная реакция:

В пульмонологической практике – для дифференциации бактериальных и вирусных видов пневмонии , туберкулёза .
В гинекологической и урологической практике – для определения уреаплазмоза , хламидиоза , микоплазменной инфекции , гарднереллеза , герпеса , гонореи .
В гастроэнтерологической практике.
В гематологии – для определения онковирусов и цитомегаловирусной инфекции .
В экспресс-диагностике таких инфекционных заболеваний как вирусные гепатиты , дифтерия , сальмонеллёз .

В настоящее время наиболее распространен данный метод в диагностике инфекционных болезней (гепатитов вирусной этиологии, ВИЧ , венерических заболеваний , туберкулёза, клещевого энцефалита ).

Что происходит во время протекания реакции?

Сама реакция является химически несложной. Источником ДНК для реакции может послужить капля крови, волос, кусочек кожи, и т.д. В теории, для проведения реакции требуются нужные реагенты, пробирка, проба из биологического материала и источник тепла.

Полимеразная реакция позволяет выявить инфекцию, даже если в пробе с биологическим материалом находится всего одна или несколько ДНК-молекул возбудителя.

Во время протекания реакции, благодаря ферменту ДНК-полимеразы, происходит удвоение (репликация ) участка ДНК. Сама же дезоксирибонуклеиновая кислота (сокращенно ДНК ) важна для нас тем, что обеспечивает хранение и передачу дочерним клеткам генетической информации. ДНК имеет вид спирали, которая состоит из повторяющихся блоков. Эти блоки составляют нуклеотиды, которые являются наименьшей частицей ДНК. Нуклеотиды образуются из аминокислот.

Процесс репликации участков ДНК происходит во время повторяющихся циклов. В каждый такой цикл копируется и удваивается не только исходный фрагмент ДНК, но и те фрагменты, которые уже удвоились в прошлый цикл амплификации. Все это напоминает процесс геометрической прогрессии.

Существует:

Естественная амплификация (то есть процесс копирования и размножения ДНК ), которая происходит в нашем организме и является детерминированным, предопределённым процессом.
Искусственная амплификация, которая происходит благодаря полимеразной цепной реакции. В этом случае процесс копирования является управляемым и позволяет удвоить даже короткие участки нуклеиновой кислоты.

После завершения каждого цикла копирования, количество фрагментов нуклеиновой кислоты возрастает в геометрической прогрессии. Именно поэтому сам процесс называют «цепной реакцией».

Спустя тридцать - сорок циклов число фрагментов достигает нескольких миллиардов.

Для амплификации in vitro (в пробирке ) необходимо, чтобы в биосреде, взятой для диагностики, присутствовал специфический чужеродный фрагмент ДНК (то есть ДНК не пациента, а возбудителя ). Если в созданном растворе не будет находиться специфический фрагмент – цепная реакция под действием полимеразы не пойдет. Этим и объясняется факт высокой специфичности ПЦР.

Этапы ПЦР-диагностики

1. Из исследуемого материала выделяют ДНК.
2. Добавляют ДНК в специальный раствор из нуклеотидов.
3. Нагревают раствор до температуры 90 - 95 градусов Цельсия, для того, чтобы белок ДНК свернулся.
4. Снижают температуру до 60 градусов.
5. При повторении циклов повышения-понижения температуры количество участков нуклеиновой кислоты возрастает.

6. Путём проведения электрофореза подводится итог, и подсчитываются результаты удвоения.

Какие преимущества имеет данная диагностика?

Универсальность: для этого метода подходят любые образцы нуклеиновой кислоты.
Высокая специфичность: возбудитель имеет уникальные последовательности цепочек ДНК, которые свойственны именно ему. Поэтому результаты проведённой ПЦР будут достоверными, в них невозможно спутать ген одного возбудителя с геном другого возбудителя.
Чувствительность к наличию даже единичной молекулы возбудителя.

Маленький объем материала, нужного для исследования. Подойдет даже капля крови. Возможность получить результат, использовав минимальный объём пробы, очень важна для педиатрических, неонатологических, неврологических исследований, а также в практике судебной медицины.
Возможность определения вялотекущей, хронической инфекции, а не только острой.
Многие болезнетворные культуры очень сложно культивировать в пробирке другими методиками, а полимеразная реакция позволяет размножить культуру в нужном количестве.

Какие недостатки имеет данная диагностика?

Если в материале, предназначенном для проведения ПЦР, находится ДНК не только живого возбудителя, но и погибшего – будет происходить амплификация обеих ДНК. Соответственно, лечение после диагностики может быть назначено не совсем верное. Через некоторое время лучше пройти контроль эффективности проведённого лечения.
Повышенная чувствительность к наличию микроорганизмов тоже может считаться, в некотором роде, недостатком. Ведь в норме в человеческом организме присутствует условно-патогенная микрофлора, то есть это микроорганизмы, которые живут в кишечнике , желудке , других внутренних органах. Эти микроорганизмы могут принести вред человеку только при определенных неблагоприятных условиях – несоблюдение гигиенических требований, загрязненная питьевая вода и т.д. ПЦР-методика амплифицирует ДНК даже этих микроорганизмов, хотя они и не приводят к патологии.
ПЦР разных тест-систем может показывать результаты, которые будут разниться между собой. Существует много модификаций данной методики: «вложенная », «ассиметричная », «инвертированная », «количественная » ПЦР и другие.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR - polymerase chain reaction) - метод получения множества копий определенных фрагментов ДНК (генов) в биологическом образце.

Сущность ПЦР как метода молекулярной биологии заключается в многократном избирательном копировании определённого гена (участка ДНК) при помощи специальных ферментов в условиях in vitro . Важной особенностью ПЦР является получение копий конкретного участка ДНК (гена), соответствующего заданным условиям. Синонимом процесса копирования ДНК является «амплификация». Репликация ДНК in vivo также может считаться амплификацией. Однако в отличие от репликации, в процессе полимеразной цепной реакции амплифицируются короткие участки ДНК (максимум 40 000 пар нуклеотидов).

Основные принципы

Итак, ПЦР - это многократное копирование определенных фрагментов ДНК in vitro в процессе повторяющихся температурных циклов. Как же протекает процесс реакции в пределах одного температурного цикла?

Образование нуклеотидной цепи осуществляется ферментом ДНК-полимеразой. Однако для начала работы ферменту необходима стартовая площадка. В качестве площадок выступают "праймеры" (затравки) - синтетические олигонуклеотиды длиной 15-20 нуклеотидов. Праймеров должно быть два (прямой и обратный), они комплементарны участкам ДНК-матрицы и именно фрагмент ДНК, ограниченный праймерами, будет многократно копироваться ДНК-полимеразой. Работа полимеразы заключается в последовательном добавлении нуклеотидов, комплементарных последовательности ДНК-матрицы. Тем самым в одном температурном цикле вновь синтезируется два новых фрагмента ДНК (т.к. молекула ДНК - двуцепочечная, то и матриц изначально две). Таким образом, за 25-35 циклов в пробирке накапливаются миллиарды копий участка ДНК, определенного праймерами. Структуру отдельного цикла можно представить следующим образом:

денатурация ДНК (плавление, расхождение цепей ДНК) - 95°С - 1 или 2 минуты;
отжиг праймеров (затравки связываются с ДНК-матрицей, температура данной стадии определяется нуклеотидным составом праймера) - 60°С (к примеру) - 1 минута;
элонгация ДНК (полимераза синтезирует цепь ДНК) - 72°С - 1 минута (время зависит от длины синтезируемого фрагмента).

Приборная база для применения метода полимеразной цепной реакции в лаборатории должна состоять из:

(или, как его еще называют, термоциклера);
системы для с (для визуализации результатов ПЦР);
системы (для анализа результатов ПЦР);
(для пробоподготовки);
набора (механических или электронных).

Помимо основного и вспомогательного оборудования для полноценного функционирования ПЦР-лаборатории, необходимы некоторые расходные материалы: стерильные наконечники, пробирки, штативы для пробирок и дозаторов.

Реагентная база в обычной ПЦР-лаборатории для проведения полноценной полимеразной цепной реакции включает в себя фермент ДНК-полимеразу с буфером, праймеры (небольшие синтетические фрагменты ДНК, комплементарные началу и концу анализируемого участка ДНК-матрицы), смесь нуклеотидов (А, Т, Г, Ц). Также абсолютно необходима очищенная вода.

Достоинства метода ПЦР

Высокая чувствительность исследования

Чувствительность метода такова, что амплифицировать в ПЦР и выявить целевую последовательность можно даже в том случае, если она встречается однажды в образце из 10 5 клеток.

Специфичность анализа

ПЦР позволяет выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина, а также проводить генотипирование. Специфически подбирая компоненты реакции (праймеры), Вы можете одновременно выявлять ДНК близкородственных микроорганизмов.

Универсальность метода ПЦР

Дело в том, что для ПЦР-диагностики инфекционных заболеваний, либо наследственных заболеваний человека можно использовать одно и то же оборудование, следовать универсальным процедурам подготовки образцов (проб) и постановки анализа, а также однотипные наборы реактивов.

Экономия времени

Важное преимущество ПЦР - отсутствие стадий культуральной микробиологической работы. Подготовка образцов, проведение реакции и анализ результатов максимально облегчен и во многом автоматизирован. Благодаря этому, время получения результата может сокращаться до 4-5 часов.

Эффективность метода ПЦР

Широта исследуемого клинического материала

В качестве образца при полимеразной цепной реакции может быть использован не только биологический материал от больного, но также и многие другие субстраты, в которых могут быть идентифицированы молекулы ДНК с высокой чувствительностью, например, вода, почва, продукты питания, микроорганизмы, смывы и многое другое.

Все перечисленные выше достоинства этого уникального метода - высокая чувствительность и специфичность, идентификация инфекционного агента и проведение генотипирования любого гена человека, высокая эффективность и экономия времени, универсальность приборной базы - позволяют широко применять сегодня метод ПЦР в клинической диагностике, медицинской практике, научных исследованиях, контроле качества и многих других областях.

Применение ПЦР

Области применения полимеразной цепной реакции как современного метода молекулярной биологии разнообразны. Во многом это обусловлено широтой материала, который можно анализировать (практически все, из чего можно выделить более-менее качественую ДНК может стать объектом исследования), а также подобранных праймеров. Основные области применения ПЦР:

клиническая медицина

диагностика инфекционных заболеваний
диагностика наследственных заболеваний
выявление мутаций
генотипирование
клеточные технологии
создание генетических паспортов

экология

мониторинг состояния окружающей среды
анализ продуктов питания
анализ генетически-модифицированных организмов (ГМО)

судебная медицина и криминалистика

идентификация личности
установление отцовства

фармакология

ветеринария

научные исследования (молекулярная биология, генетика)

Организация лаборатории ПЦР

Информация для заказа

Наименование	Объем	Производство	Метод	Кат.Номер

Диагностика инфекционных заболеваний – бактериальных и вирусных – направлена на раннее выявление возбудителей, что позволяет назначать раннюю и максимально эффективную терапию. Самым современным способом диагностики инфекций является ПЦР или полимеразная цепная реакция. Так что же это за метод, и для чего он нужен?

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.

Как сдать кровь на ПЦР

При подготовке к анализу следует придерживаться общих рекомендаций: не пить и не есть непосредственно перед анализом крови. Хотя для сдачи крови на ПЦР можно так строго не придерживаться этих требований, так как точность исследования не зависит от того, на сытый или голодный желудок был взят анализ.

Какие заболевания можно выявить с помощью ПЦР

С помощью ПЦР можно выявить практически любые вирусные и бактериальные заболевания. Для анализа используется не только кровь, но и другие биологические материалы: сперма, слюна, мазки из уретры и с шейки матки. Анализ крови будет информативен в том случае, если возбудитель конкретного заболевания проникает в кровь человека. Поэтому ПЦР крови назначают при следующих заболеваниях:

вирусные гепатиты А, В, С, D и TT;
цитомегаловирус;
герпетическая инфекция (вирусы герпеса 1, 2 и 4-го типов);
ВИЧ-инфекция
энтеровирусная инфекция;
опоясывающий лишай;
краснуха;
токсоплазмоз;
инфекционный мононуклеоз;
листериоз.

Если же взять во внимание возможность проведения ПЦР других биоматериалов, то в список заболеваний, выявляемых с помощью ПЦР, следует добавить:

гарднереллез;
сальмонеллез;
(порядка 100 различных штаммов вируса папилломы человека);
трихомониаз;

Особо актуально в настоящее время ПЦР анализа крови беременной на так называемые : цитомегаловирус, токсоплазмоз, краснуху и . Связано это с тем, что упомянутые заболевания могут привести к аномалиям развития плода.

Преимущества ПЦР

Недостатки анализа

ПЦР является высокотехнологичным методом исследованием и предъявляет высокие требования к оснащению лаборатории. Помещение, где делают анализ, обязательно должно быть оснащено фильтром биологической очистки, так как в воздухе постоянно присутствуют частицы кожи, слюны, содержащие в своем составе молекулы ДНК. Несоблюдение техники работы с биоматериалами может стать причиной неверного результата.

Анализ крови – расшифровка у взрослых (ПЦР)

Трактовка результатов этого исследования не представляет сложностей, потому что отсутствует таблица норм анализа крови на ПЦР. В бланке результатов могут фигурировать лишь две фразы:

отрицательный результат – возбудитель, на который проводился анализ, не выявлен;
положительный результат – в организме имеется возбудитель указанного заболевания.

Следует знать, что ПЦР может быть положительной даже при отсутствии клинических симптомов заболевания! Расшифровка анализа крови на ПЦР у детей не отличается от таковой у взрослых.

Кому нужно сдать анализ на ПЦР

Любой человек может сдать кровь для исследования. Прямым показанием для исследования является подозрение на инфекции передающиеся половым путем ( , гарднереллез, ВИЧ-инфекция). При случайном незащищенный половом контакте только ПЦР поможет поставить диагноз на ранней стадии, если человек заразился каким-либо заболеванием. В обязательном порядке кровь на TORCH-комплекс сдают беременные женщины. А также женщины, только .

Полимеразная цепная реакция известна уже 30 лет. Ее широко используют во многих областях, начиная с археологии и заканчивая генетикой.

Именно метод пцр помогает установить отцовство, но наиболее часто его используют для выявления различных инфекционных болезней в организме человека.

Как проводят анализ методом пцр, и что это такое? На эти вопросы мы постараемся детально ответить.

Анализ ПЦР - что это такое?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.

Метод ПЦР - абсолютно специфичен и выполненный правильно не может дать ложноположительный результат. То есть, если инфекции нет, то анализ никогда не покажет, что она есть. Поэтому сейчас очень часто для утверждения диагноза дополнительно сдают анализ ПЦР, чтобы определить возбудителя и его природу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в 1983 году разработал Кэри Мюллис (США), за что в 1993 году он удостоен Нобелевской премии в области химии.

В чем преимущество данного метода?

Диагностика этим методом позволяет найти возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. Это самый точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции, различные венерические заболевания.

Отличия ПЦР-диагностики от других методов лабораторного исследования заключаются в следующем:

метод нацелен на выявление самого возбудителя;
диагностика методом ПЦР отличается универсальностью: для обнаружения возбудителей нескольких;
заболеваний достаточно только одного биологического образца больного;
метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями.

Кроме этого, преимуществом ПЦР-диагностики является то, что для анализа пригоден любой биологический материал пациента: кровь, выделения из половых органов, моча, сперма.

Какие инфекции позволяет выявить мазок на ПЦР?

В организме может присутствовать большое количество возбудителей инфекций, сюда относятся и «скрытые», которые длительное время никак себя не проявляют.

Анализ мазка на ПЦР позволяет выявить такие инфекции :

уреплазмоз половых органов;
кандидоз ();
герпес;
наличие раковых клеток;
оценить гормональное состояние;

Исследуемым материалом для ПЦР обычно являются мокрота, слюна, моча, кровь. Перед проведением анализа необходимо тщательно подготовиться к нему, получив предварительную консультацию у врача.

Кровь для ПЦР обычно сдается натощак. Хорошие результаты показывает проведение анализа, когда материал для исследования взят из цервикального канала или уретры. В этом случае лучше всего провести ПЦР-диагностику не позже, чем через сутки после полового акта.

Разновидности ПЦР

ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. Существуют разные методики проведения анализа:

ПЦР с обратной транскрипцией (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (англ.)) - используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК.
Инвертированная ПЦР (Inverse PCR (англ.)) - используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
Вложенная ПЦР (Nested PCR (англ.)) - применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции.
Асимметричная ПЦР (англ. Asymmetric PCR) - проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.
Количественная ПЦР (Quantitative PCR, Q-PCR (англ.)) или ПЦР в реальном времени - используется для непосредственного наблюдения за измерением количества конкретного ПЦР продукта в каждом цикле реакции.
Ступенчатая ПЦР (Touchdown PCR (англ.)) - с помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров.
Групп-специфическая ПЦР (англ. group-specific PCR) - ПЦР для родственных последовательностях внутри одного или между разными видами, используя консервативные праймеры к этим последовательностям.

Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Например, последовательность праймера может быть такой: …ATH…, где Н - А, Т или С.

Какие биологические материалы исследуются?

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК бактерии или ДНК или РНК вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека:

Моча . Может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
Мокрота . Применяется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
Биологические жидкости . Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек . Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
Биоптаты . Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.
Кровь, плазма, сыворотка . Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.

Как подготовиться к сдаче анализа?

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

Моча сдается утром в стерильный контейнер.
Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
Не стоит проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка анализа ПРЦ

Процесс интерпретации представленного исследования отличается своей простотой. Результаты пцр анализа можно получить через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день, и вот что они могут означать:

Отрицательный результат показывает, что в диагностируемом материале отсутствует искомый инфекционный возбудитель.
Пцр положительный обозначает, что в организме человека присутствует ДНК или РНК возбудителя.

В некоторых случаях производят количественное определение микроорганизмов. Это особенно актуально при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Так как данные бактерии проявляют свое негативное воздействие лишь при избыточном количестве.

Также количественный анализ ПЦР важен для выбора терапевтической тактики и с целью контроля над лечением таких вирусных инфекций, как ВИЧ и вирусы гепатита.

Насколько точна ПЦР диагностика инфекций?

Метод ПЦР отличается высокой точностью, специфичностью и чувствительностью. Это означает, что данный анализ способен:

точно определить наличие или отсутствие инфекции;
точно указать, что именно это за инфекция (специфичность);
обнаружить инфекцию даже при очень низком содержании ДНК микробов в биологическом материале,
который был подвергнут исследованию (чувствительность).

ПЦР анализ: цена и сроки

Цена конкретного анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию вы будете проверяться. Примерные цены и сроки:

ИППП: 300-500 руб, сроки – 1 день;
Вирус Эпштейна-Барра, вирус папилломы человека, герпеса, цитомегаловирус: 300-500 руб, сроки – 1 день;
Гепатит A, B, C, D, G: качественный анализ 650 руб, количественный анализ 2000 руб. Сроки – до 5 дней;
Антитела к вирусу гепатита С, суммарные (Anti-HCV) – 420 руб;
Антитела к вирусу гепатита C, IgM (Anti-HCV IgM) – 420 руб;
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori): 300-400 руб, сроки – 1 день;
ВИЧ (антитела и антигены) – 380 руб;
РНК ВИЧ, качественно – 3 500 руб;
РНК ВИЧ, количественно – 11 000 руб.

Чтобы сэкономить средства, можно выбирать фиксированный пакет анализов. Такую услугу предоставляет большинство клиник где можно сдать анализ методом ПРЦ (инвитро, онклиник и т.д).